Обнаружение методом ПЦР ATOPOBIUM VAGINAE у женщин с синдромом бактериального вагиноза

Водопьянов А.С., Водопьянов С.О., Павлович Н.В., Геворкян Р.С.

РостНИПЧИ Роспотребнадзора, г. Ростов-на-Дону
Женская консультация № , г. Ростов-на-Дону

Недавно описан микроорганизм - Atopobium vaginae, который, как установлено, включается в патогенез бактериального вагиноза (БВ), осложняя его течение и лечение (Jovita M. et al, 1999; Bradshaw C.S. et al., 2006). Внимание исследователей привлек тот факт, что при наличии этого микроорганизма в ассоциации с другими анаэробными микробами, вызывающими БВ, заболевание значительно хуже поддается лечению метронидазолом. Позже было продемонстрировано, что некоторые штаммы A.vaginae характеризуются высоким уровнем резистентности к этому химиопрепарату (Backer E et al.,2006). В этой связи для выбора наиболее адекватной терапии  необходимо проведение грамотной диагностики с выявлением всех возможных ассоциантов, участвующих в формировании синдрома БВ. Однако бактериоскопический метод, достаточно успешно используемый для диагностики БВ, оказался малопригоден для детекции A.vaginae в связи с выраженным полиморфизмом бактерий (от мелких Грам-позитивных кокков до палочек) (Schwiertz A. et al., 2006). Кроме того, этот микроорганизм плохо поддается культивированию на искусственных питательных средах (Jovita M. еt al, 1999; Schwiertz A. et al., 2006). Поэтому, в настоящее время обнаружение A.vaginae базируется на молекулярно-биологических методах исследования – ПЦР-анализе. Вместе с тем, недостаточная изученность этиологической значимости A.vaginae в формировании БВ определяет тот факт, что методы современной диагностики БВ не предусматривает выявление этого микроорганизма.
В этой связи, целью настоящей работы явилось изучение возможности обнаружения A.vaginae с помощью ПЦР-анализа микрофлоры отделяемого влагалища женщин детородного возраста с синдромом БВ, обратившихся за гинекологической помощью в поликлинику №   г. Ростова-на-Дону.

Материалы и методы
Исследована микрофлора отделяемого влагалища 48 женщин в возрасте от 16 до 48 лет, обратившихся в гинекологическое отделение с жалобами или клинической картиной БВ, из которых у 32 был установлен БВ.
Микробиологическое исследование включало микроскопию мазков материала заднего свода влагалища с окраской по Граму для оценки качественного состава вагинальной микрофлоры (наличие резидентной микрофлоры, наличие мелких Грам-вариабельных бактерий, формирование ключевых клеток).     
ПЦР-анализ проводили с использованием праймеров, предложенных Ferris et al., 2004; термостабильной ДНК-полимеразы (Taq- полимераза,"ДиаЛат", Москва)  в темоциклере МС -2 "Терцик" (АО "ДНК-Технология", Москва). Режим амплификации после внесения минерального масла составлял: денатурация - 940 С, 35 сек; отжиг - 600 С, 25 сек; синтез - 720 С, 35 сек (всего - 40 циклов).

Результаты исследования
При исследовании женщин на наличие в вагинальном содержимом ДНК A.vaginae методом ПЦР установлено ее присутствие при достаточно высокой степени выявления (47%). Интересно отметить, что наибольшее число положительных находок (до 70% от количества позитивных по A.vaginae обследованных) приходилось на пациенток со смешанной анаэробной микрофлорой (G. vaginalis как доминирующая культура в ассоциации с Mobiluncus, Fuzobacterium или Bacteroides spp). В то же время при моноинфекции, вызванной G. vaginalis, частота обнаружения составила лишь 30%. Полученные результаты согласуются с данными других авторов о существовании прямой коррелятивной связи G. vaginalis и A.vaginae (Schwiertz A. et al., 2006).
Таким образом, при выраженном анаэробном дисбиозе, помимо известных анаэробных видов бактерий, достаточно часто может присутствовать относительно новый ассоциант - A.vaginae. Вопрос о его этиологической значимости в формировании БВ на сегодняшний день остается открытым и нуждается в накоплении более обширных данных.

Частота выявления Atopobium vaginae  и Gardnerella vaginalis методом полимеразной цепной реакции у сексуально-активных женщин
Агапов С.А., Водопьянов А.С., Олейников И.П., Водопьянов С.О.

РостНИПЧИ Роспотребнадзора, г. Ростов-на-Дону

Вагинальный атопобиум (Atopobium vaginae) в настоящее время считается одним из возбудителем бактериального вагиноза (7).Было отмечено более редкое обнаружение A.vaginae у женщин с нормальной микрофлорой,чем у женщин с бактериальным вагинозом (3,6) и у девственниц (1).Для детекции A.vaginae предложены ПЦР (2,4) и ПЦР real time (5).Однкао число публикаций и количество проведенных исследований пока невелико,чтобы сделать однозначные выводы о специфичности A.vaginae для диагностики бактериального вагиноза.Нами было проведено исследование целью которого было определить частоту выявления G.vaginalis и A.vaginae у сексуально-активных женщин с нормальной микрофлорой и у женщин с бактериальным вагинозом и возможности использования метода ПЦР как скрининговой реакции для диагностики бактериального вагиноза
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: Определить частоту выявления у сексуально-активных женщин G.vaginalis и A.vaginae у женщин с нормальной микрофлорой и у женщин с бактериальным вагинозом.
МЕТОДЫ: Методом ПЦР исследовались вагинальные образцы,взятые от 136 женщин в возрасте от 17 до 45 лет,имеющих 2 и более половых партнеров в год.A.vaginae выявлен в 43 случаях (31.6 %),G.vaginalis в 89 (65,4 %) от общего числа исследуемых образцов.Бактериальный вагиноз был выявлен у 48 (35.2%) женщин.Наличие бактериального вагиноза оценивали по наличию 3 и более критериев Амселя.Частота вывления A.vaginae и G.vaginalis у женщин с бактериальным вагинозом составила соответственно 36 (75 %)  и 48 (100%),а у женщин без бактериального вагиноза  (n=88) A.vaginae выявлен в 7 (7,9%) случаев,а G.vaginalis в 41 (46,5 %) случаев.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: Таким образом, Atopobium vaginae значительно чаще встречается у женщин с бактериальным вагинозом,чем у женщин с нормальной микрофлорой,что позволяет использовать его обнаружение с помощью ПЦР для скрининговой диагностики бактериального вагиноза.

ПРИМЕНЕНИЕ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ АНАЭРОБНЫХ БАЛАНОПОСТИТОВ У МУЖЧИН
Агапов С.А., Водопьянов А.С., Водопьянов С.О., Олейников И.П.

РостНИПЧИ Роспотребнадзора, г. Ростов-на-Дону

Введение. G E Cree, A T Willis (1982) называют этиологическими агентами анаэробного баланопостита - Bacteroides spp. (в основном B.fragilis и B. melaninogenicus), Fusobacterium spp. и анаэробные кокки. Спустя месяц после этой публикации Kinghorn GR, Jones BM, (1982 г) приводят данные своих исследований о причинной роли Gardnerella vaginalis в развитии анаэробного баланопостита. Gardnerella vaginalis была выявлена 7.2-8.0% от всех больных баланопоститами, а в группе некандидозных баланопоститов составляла 31% случаев,в 75% из которых были выявлена ко-инфекция - Bacteroides spp. Эти исследования подтверждают Burdge DR, Bowie WR в 1986. Sarah Edwards (1996) приводит данные исследований, выявивших анаэробные бактерии у 29 пациентов из 104 с баланопоститами. В основном изоляты были представлены Bacteroidespp. (B. melaninogenicus,B. assacharolytica и B. ureolyticus). В дальнейшем исследовалась возможность сексуальной передачи Gardnerella vaginalis: Nancy G.Wahl, Magolia A. Castilla (1998), которые исследовав группу мальчиков не выявив у них изолятов микроорганизма, доказали, что G. vaginalis не является обычным обитателем мочеполовой системы мужчины и передается при сексуальных контактах. Британская ассоциация по борьбе с половыми инфекциями BASHH (2001) официально считает Gardnerella vaginalis одним их инфекционных этиологических факторов баланопостита.
Важное значение представляет выявление так называемой вагиноз - ассоциированой группы анаэробов у мужчин с баланопоститом. Определение возбудителя заболевания является решающим фактором для назначения адекватной терапии и быстрому излечению пациента, учитывая тот факт, что наиболее частые анаэробы ,такие как Mobiluncus spp и Atopobium vaginae в большинстве случаев резистентны к традиционной терапии анаэробной инфекции метронидазолом (Ellen De Backer, Rita Verhelst, Hans Verstraelen 2006). Другим, не менее важным фактором является разграничение лабораторными методами диагностики кандидозного и анаэробного баланопоститов, имеющих при легком течении заболевания в большинстве случаев сходную клиническую картину.
 
Материалы и методы. Под наблюдением в период с 2006 - 2009 гг  находились 572 мужчины возрасте от 17 до 56 лет с жалобами на зуд и неприятный запах  в области головки полового члена и с клиническими признаками баланопостита: гиперемии и отека крайней плоти, наличия макул красного цвета в области головки полового члена и венечной борозды, наличия налета в области головки полового члена и препуциального мешка.
Давность заболевания варьировала от 3 дней до 6 месяцев.168 (29,3%)пациентов ранее обращались за медицинской помощью и получали безуспешную терапию местными антимикотиками (клотримазол, тербинафин, миконазол).
Для диагностики использовался метод ПЦР. Забор проб осуществлялся путем соскоба  с очагов поражения с головки полового члена, венечной борозды и крайней плоти, а также отделяемого препуциального мешка. Всем наблюдаемым пациентами проводилось исследования на четыре микроорганизма: С.albicans, G. vaginalis, Mobiluncus spp.и Atopobium vaginae.

Результаты. В результате обследования были выделены 2 группы пациентов. Первая группа составила 378 пациентов (66,1 %), у которых были выявлены С.albicans, вторую группу 194 пациентов (33,9%) составили мужчины с отрицательным результатом обследования на С.albicans.Частота выявления вагиноз-ассоциированных анаэробов в обоих группах представлена в таблице 1.

Таблица 1.Частота выявления С.albicans и вагиноз-ассоциированных микроорганизмов у мужчин с баланопоститом

Частота выявления  вагиноз-ассоциированных микроорганизмов в группе мужчин с некандидозным баланопоститом (n=194) составила G.vaginalis  57 случаев; G.vaginalis и Mobiluncus spp 18 случаев; G.vaginalis  и Atopobium vaginae 6 случаев; G.vaginalis,  Mobiluncus spp  и Atopobium vaginae 6 случаев; Mobiluncus spp 9 случаев; Mobiluncus spp и Atopobium vaginae 8 случаев; Atopobium vaginae 7 случаев. Не выявлено микроорганизмов из указанных групп 47 случаев.

Выводы. Применение полимеразной цепной реакции позволяет выявить этиологические причины баланопоститов у мужчин и с учетом результатов провести целенаправленную этиотропную терапию.
 

Литература
 

1. Management of balanitis (British Association for Sexual Health and HIV  2001)

2. Burdge DR, Bowie WR.Gardnerella vaginalis-associated balanoposthitis.(Sex Transm Dis. 1986 )
3. Kinghorn GR, Jones BM.Balanoposthitis associated with Gardnerella vaginalis infection in men. (Br J Vener Dis. 1982)
4. Burdge DR, Bowie WR.Gardnerella vaginalis carriage in male patients.(Trop Geogr Med. 1986)
5. G E Cree, A T Willis.Anaerobic balanoposthitis.Br Med J (Clin Res Ed). 1982 
6. Nancy G.Wahl,Magolia A. Castilla .Prevalence of Gardnerella vaginalis in Prepubertal Males ( Arch Pediatr Adolesc Med.1998) 
7. Sarah Edwards Balanitis and balanoposthitis: a review.(GENITOURINARY MEDICINE, Volume 72, Number 3: Pages 155-9, June 1996)

Связь Atopobium vaginae и Gardnerella vaginalis с бактериальным вагинозом и его рецидивом после пероральной терапии метронидазолом

Ссылка на источник

Мы изучили связь между Atopobium vaginae и бактериальным вагинозом и роль, которую A. vaginae играет в рецидиве бак вагиноза после терапии метронидазолом.

МЕТОДЫ. В исследование были включены 358 женщин, имеющих вагинальный диском-форт или неприятный запах. Определение Atopobium vaginae and Gardnerella vaginalis проводи-лось методом ПЦР. Женщины с бактериальным вагинозом (всего 139 и имеющих более 3 диаг-ностических критериев бак вагиноза) были пролечены метронидазолом (по 400 мг дважды в день в течении 7 дней). Контрольное обследование проводилось через 1, 3, 6 и 12 месяцев или по рецидиву инфекции Atopobium vaginae или Gardnerella vaginalis.

РЕЗУЛЬТАТЫ. Atopobium vaginae и Gardnerella vaginalis были высоко специфичны для бак вагиноза в 96% (доверительный интервал р<0.03) и в 99% (при доверительном интервале p<0.05). Однако Atopobium vaginae (обнаружен в 77%) оказался более специфичен для бактери-ального вагиноза чем Gardnerella vaginalis (обнаружена в 35%). Atopobium vaginae более редко встречался без Gardnerella vaginalis, а женщины, имеющие двух микроорганизмов, имели гораз-до больше рецидивов бактериального вагиноза (83%), чем женщины, имеющие только Gard-nerella vaginalis (38%).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Инфекция, вызванная Atopobium vaginae более специфична для бактери-ального вагиноза чем инфекция, вызванная Gardnerella vaginalis. Большая частота рецидивов бактериального вагиноза у женщин, имеющих A vaginae и G vaginalis подтверждает, что Atopo-bium vaginae вносит больший вклад в развитие бактериального вагиноза. Однако его этиологическая роль остается пока неясной.

Перевод: Водопьянов А.С. 2007 год

alexvod@diagnostica.su

Антибиотикочувствительность Atopobium vaginae

BMC Infect Dis. 2006 Mar 16;6:51.

Ссылка на источник

Предыдущие исследования установили что недавно описанная анаэробная бактерия, Atopobium vaginae связанна с бактериальным вагинозом. Мы установили, что штаммы этого труднокуль-тивируемого микроорганизма высоко резистентны к метронидазолу, но чувствительны к клин-дамицину.

МЕТОДЫ. В работе были использованы девять штаммов Atopobium vaginae, четыре штамма Gardnerella vaginalis, два штамма Lactobacillus iners и по одному штамму Bifidobacterium breve, B. longum, L. crispatus, L. gasseri и L. Jensenii.

РЕЗУЛЬТАТЫ. Все девять штаммов Atopobium vaginae были высоко резистентны к налидиксовой кислоте и колистину (колистин – это полимиксин Е - прим. Водопьянов А.С.), тогда как рост штаммов ингибировался даже низкими концентрациями клин-дамицина, рифампицина, азитромицина, пенициллина, ампициллина, ципрофлоксоцина, лине-золида (в России линезолид известен под названием ЗИВОКС - прим. Водопьянов А.С.). Мы установили, что устойчивость к метронидазолу варьирует от 2 до 256 мкг/мл. Четыре штамма G vaginalis были также чувствительны к клиндамицину, три из которых были чувствительны и к метронидазолу в концентрации 1 мкг/мл. Все штаммы лактобактерий были устойчивы к метро-нидазолу, но чувствительны к клиндамицину.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Клиндамицин более высокоактивен против Gardnerella vaginalis и Atopobium vaginae чем метронидазол, но не все штаммы A vaginae устойчивы к метронидазолу, хотя такой вывод делался в предыдущих работах, проведенных с использованием меньшего числа штам-мов.

Перевод: Водопьянов А.С. 2007 год

alexvod@diagnostica.su